CONTACT WAY联系方式

地址: 北京市丰台区科兴路9号国际企业孵化中心401室
电话: 010-51668388
邮箱: service@premedlab.com

首页 | 技术支持 | 技术专栏

技术快报---OpenSPR助力乙型肝炎疫苗接种方案的研究

     

  乙型肝炎病毒(HBV)每年导致全球超过80万人死亡。在亚洲和撒哈拉以南非洲等许多发展中地区,它仍是一个威胁全球健康的因素。HBV倾向于在人肝细胞中显现和复制,并且主要从母亲到后代进行垂直传播。此外,暴露于受感染的体液(即共用针头,与感染者性交)也会导致传播。

      HBV属于Hepadnaviridae病毒家族的双链DNA(dsDNA)病毒,疫苗已接种近四十年。然而,常规HBV疫苗接种方案依赖于肌肉内由S.derevisiae细胞转染产生的小乙型肝炎表面(SHBs)蛋白。值得注意的是,SHBs只是三种主要治疗HBV抗原中的一种,并且文献表明针对剩下的两个抗原表位,即pre-S1和pre-S2表位,可能会带来有效的优势。

     最近,Yu-Ching Lee博士使用OpenSPR的局域表面等离子体共振技术获得了所需的关键数据,并发表文章“S17抗体与乙型肝炎病毒pre-S2表位的功能性结合区域的相互作用”,研究过程中用OpenSPR获得的数据探测了单链可变片段(scFv)抗体与pre-S2表位之间的相互作用,其可能增强了现有HBV免疫治疗的方案。

摘要

       HBV由三种主要的病毒包膜蛋白组成,称为乙型肝炎表面蛋白(HBs),它由226个氨基酸残基的小乙型肝炎表面蛋白(SHBs),281个残留的中间乙型肝炎表面蛋白(MHBs)和400个残留大型乙型肝炎表面蛋白(LHBs)。传统的疫苗接种方案是在20世纪80年代发展起来的,它是围绕着SHBs的肌肉组织,其中转染的酵母细胞是该抗原的制造者,随后将其配置成商业免疫治疗剂。然而,接种疫苗后无应答者的人数很多,这就是为什么需要找出更有效的免疫保护方法的原因。

        文章表明,在免疫治疗法中使用MHBs和LHBs(分别为pre-S1和pre-S2表位)已在鼠模型中被证明是有效的预防性的疫苗接种方案。先前的研究还表明,pre-S1/S表位的引入也可以为更持久的HBV感染提供有效的干预。具体来说,pre-S2抗原表位被认为是乙肝病毒对肝细胞的一种主要调节剂,是HB病毒入侵肝细胞的标志。值得注意的是,患者暴露于pre-S2表位引发比其他上述表位表现出更高的免疫应答;该多肽的残基123-145因与有效中和作用相关而臭名昭著。通过这种方式,pre-S2的表位与工程化抗体的相互作用已成为免疫学家的热门研究。

       在这篇文章中,研究人员采用噬菌体表面呈现技术从HBV患者中分离人scFv,随后通过ELISA和Western Blots选择主要候选物进一步分析pre-S2表位。在scFv抗体用流式细胞术和免疫细胞化学染色后,S17被用于计算机模拟和表面等离子体共振(SPR)检测。

分析

     表面等离子体共振研究的结果表明,scFv S17是HBV病毒包膜上发现的针对pre-S2表位的非常强的中和剂。因此需要注意的是,完整的IgG分子结构的结合可能会提高亲和力。

OpenSPR对此项研究的帮助

        OpenSPR具有操作简单、不受温度及缓冲液折射率影响、出结果速度快,检测稳定灵敏等特点,本研究利用OpenSPR的表面等离子体共振(SPR)技术快速的确定了pre-S2表位和scFv抗体S17之间的相互作用。实验将pre-S2肽固定在链霉抗生物素蛋白传感器上,并在OpenSPR系统上进行抗体-抗原反应实验。通过使用OpenSPR,作者能够确定S17抗体与固定的pre-S2表位之间相互作用的动力学数据(结合和解离速率常数,平衡常数和亲和力)。 SPR结合曲线显示S17在与pre-S2相互作用方面是有效的,并且来自该实验的定量数据表明平衡解离常数(KD)为4.2x10-8M。由该研究产生的结果表明scFv S17抗体可以作为通过靶向HBV pre-S2表位的有效免疫治疗剂,并且可以转化为改进的针对HBV感染的疫苗接种方案。通过使用OpenSPR,研究人员能够从他们自己的工作平台获得SPR数据,这有助于他们加快研究并更快地发布他们的发现。

       SPR是一项无标记的检测技术,研究人员可以定量分析两种生物分子之间的结合。 SPR技术使我们能够确定相互作用的kon,koff和KD,与仅提供终点测量的其他技术如pull-down实验相比,更能深入了解分子间的相互作用。 SPR不仅对于发表文章是必要的,而且对于许多医学和医学研究领域的发展也是必要的,如下图所示,近几年,依靠SPR数据发表的文章数量呈显著增长。


Scientific publications involving SPR have increased drastically over the years. SPR has become fundamental for publications while traditional techniques like Western Blots are becoming less important

 OpenSPR是用户友好及低维护成本的、“低技术门槛”的下一代SPR解决方案的技术,目前已有数百名研究人员在使用。通过触手可及的LSPR技术,您不但可以获得所需的高质量数据,同时加快您的研究和发文章的速度!


Nicoya OpenSPR分子互作在乙型肝炎疫苗接种方案研究中的优势:

• 操作简单---1小时即可掌控;

• 完整动力学参数检测---Ka,Kd,KD;

• 高效率---上样、出结果,一键式分析,10min出结果,1-2h出完整动力学检测结果;

• 高精准---检测不受温度、缓冲液折射率影响;

• 无需专用校正通道---可忽略的bulk效应;