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Nicoya新一代SPR轻松搞定脂类动力学研究 --半小时即可掌握的高端技术

 Nicoya新一代SPR轻松搞定脂类动力学研 --半小时即可掌握的高端技术

表面等离子共振技术:SPR通常被用来分析蛋白与蛋白,蛋白与小分子,蛋白与核酸,蛋白与适配体,蛋白与脂质体等分子间的相互作用。目前另一个非常热的方向是脂类结合动力学研究,已经有很多科学家使用SPR技术测定了脂类的亲和力和脂类为什么要研究脂类的相互作用

         细胞膜由磷脂双分子层组成含有一千多种脂类。脂类通过靶蛋白直接参与细胞信号的过程,也就是说脂类对于细胞的信号传导和转运过程是非常重要的。将近一半多的蛋白都定位在上,因此很多脂类与蛋白的相互作用需要被鉴定。

        为什么说研究脂类的亲和力和特异性很重要?

        使用SPR技术对于确定在细胞信号传导过程中脂类的特异性和膜的亲和力有重要作用。在生物化学和生物物理学的一些领域有几个实验方法可以测定亲和力和特异性,但是SPR技术是一种非标记的技术。

               怎样用SPR 技术研究脂类呢?

 SPR 专用的LIP-1芯片,其表面含供价偶联的亲脂基团,可以捕获脂质囊泡 (图1) 或脂质体,模拟生物膜、是一种研究膜系统的便捷方式 ,可以固定脂质体,也可以使用LIP-1芯片研究转膜蛋白,将蛋白重组到脂质体上并用LIP-1芯片来捕获脂质体。




利用SPR 技术研究脂类有什么优势呢?

SPR技术研究脂类动力的过程操作简单,实验周期短;并且可量化分析两个分子间的相互作用,精确获取结合常数Ka, 解离常数Kd 和亲和力常数KD,为后期的实验提供帮助。Nicoya还有一类芯片可以固定脂类到芯片上,即MEM-1芯片 其是由疏水的长链烷烃分子包被的,脂类分子疏水链嵌入疏水层,亲水端分布在芯片表面。

利用这两种芯片可轻松研究:脂质体-蛋白、膜蛋白-蛋白、外周蛋白-蛋白 相互作用,解析细胞生命活动机理。


实验方法:


1)将 LIP-1 芯片从试剂盒中取出,水洗干净插入OpenSPR 仪器 
2)以最大流速(150 µL/min)运行OpenSPR 仪器  
3)在达到信号基线后,仪器注入80%的IPA(异丙醇)或酒精进行排气泡,达到基线后,用缓冲液冲洗样本环并用空气排空。
4) 注入 200 µL 的20 mM CHAPS 初始化芯片表面.基线稳定后. 用缓冲液冲洗样本环并用空气排空。
5) 降低泵速至 20 µL/min.取稀释于运行缓冲液中的脂质体 200 µL (浓度 0.1-0.5 mg/mL), 从上样口注入样本环,脂质体从样本环进入流动池,与芯片并相互作用5分钟 .
6)   基线达到150-200pm并稳定后,即可将和脂质体相互作用的分析物注入
7) 不同浓度的分析,注入1-10mM的HCL 将分析物系统即可,信号实时在线可见。
8)检测完毕后,用TraceDrawer 进行分析,2分钟分析数据。

9)芯片可以是重复使用,如需要重新固定新的脂质体配体,使用 20 mM CHAPS 即可将旧的脂质体从芯片表面去除 ,之后 150 µL/min 高速缓存也冲洗芯片表面即可。


 图1 蛋白#1与固定的脂类的结合曲线    图2蛋白#2与固定的脂类的结合曲线